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產(chǎn)品名稱：中國倉鼠卵巢細(xì)胞；CHO-K1
英文簡稱：CHO-K1細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X968321
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長

凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

UMNSAH/DF-1細(xì)胞    雞胚胎成纖維細(xì)胞；UMNSAH/DF-1    T25    成纖維母細(xì)胞樣    貼壁生長    DMEM(高糖）+10%FBS（gibco）    1：2傳代

Duckembryo細(xì)胞    鴨子胚胎成纖維細(xì)胞；Duckembryo    T25    成纖維母細(xì)胞樣    貼壁生長    FM培養(yǎng)基    1：2傳代

CNE2細(xì)胞    鼻咽癌細(xì)胞；CNE2    T25    上皮細(xì)胞樣    貼壁生長    1983年由谷淑燕、孔繁裔等建系；源自人鼻咽低分化鱗癌組織；原代細(xì)胞胰蛋白酶消化，48小時(shí)開始生長，傳代20天。裸鼠體內(nèi)移植100%成瘤。    RPMI1640+10%bovinecalfserum    1：2傳代

CNE細(xì)胞    鼻咽癌細(xì)胞；CNE    T25    上皮樣    貼壁生長    此細(xì)胞株來源于一位58歲女性鼻咽癌患者。    RPMI1640+10%FBS    消化CQ-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。

NCI-H716細(xì)胞    結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；NCI-H716    T25    上皮細(xì)胞樣    懸浮生長，聚團(tuán)，少數(shù)貼壁    從一位經(jīng)5-氟尿嘧啶治療的患者腹水中得到的細(xì)胞建立了這個(gè)細(xì)胞株。 與其它結(jié)直腸癌細(xì)胞系不同，這株細(xì)胞有多巴脫羧酶，細(xì)胞質(zhì)中有核心致密的內(nèi)分泌型顆粒。 這株細(xì)胞不表達(dá)TAG-72 或CA19-9抗原，也不生成癌胚抗原（CA-A）    RPMI1640+10%FBS    1:3～1:6傳代，每周換液2～3次

LS174T細(xì)胞    結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；LS174T    T25    上皮樣    貼壁生長    LS 174T是LS 180 (ATCC CL 187)結(jié)腸腺癌細(xì)胞株的胰蛋白酶化變種。 它比親本更易傳代，象LS 180一樣生成大量的癌胚抗原(CA-A)。 電鏡研究表明有豐富的微絲和細(xì)胞質(zhì)粘液素液泡。 直腸抗原3陽性。 p53抗原表達(dá)陰性，但mRNA表達(dá)陽性。 與ATCC CL-187來源于同一個(gè)腫瘤。LS 174T細(xì)胞角蛋白染色陽性。 癌基因CS-myc, N-myc, H-ras, N-ras, Myb, 和 fos的表達(dá)呈陽性。 癌基因k-ras和sis的表達(dá)未做檢測。
   DMEM(高糖）+10%FBS    1：2傳代

COLO320HSR細(xì)胞    結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO320HSR    T25    半貼壁生長    該細(xì)胞1984年建系，源自一位33歲患有大腸腺癌男性經(jīng)5-fu治療后的腹水。    RPMI1640+10%FBS    1:2。3天內(nèi)可長滿。

COLO320DM細(xì)胞    結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO320DM    T25    圓形的并能折光的    半貼壁生長    該細(xì)胞可產(chǎn)生5-羥色胺、去甲腎上腺素、腎上腺素、ACTH和甲狀旁腺素。角蛋白、波形蛋白弱陽性    RPMI1640+10%FBS    1:2。3天內(nèi)可長滿。

DLD-1細(xì)胞    結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞；DLD-1    T25    上皮細(xì)胞樣    貼壁生長    DLD-1是1977-1979年間D.L.Dexter和同事分離的兩株結(jié)直腸腺癌細(xì)胞株中的一株。在ATCC和其它地方進(jìn)行的DNAfingerprinting和染色體組型分析表明這株細(xì)胞與HCT-15(CCL-225)相似，說明這兩者是來自同一個(gè)人的不同克隆。他們的遺傳起源可通過DNAfingerprinting證實(shí)，但染色體組型分析顯示它們?nèi)狈θ旧w標(biāo)記一致改變或數(shù)目上一致改變。細(xì)胞的CSAp陰性(CSAp-)。DLD-1細(xì)胞的p53抗原表達(dá)呈陽性(p53抗原產(chǎn)生了一個(gè)CS->    RPMI1640+10%FBS    消化5分鐘。1:2。4-5天長滿。

NCI-H508細(xì)胞    結(jié)腸直腸腺癌細(xì)胞；NCI-H508[H508]    T25    貼壁生長    RPMI1640+10%FBS    1：2傳代

HCT/Taxo1細(xì)胞    結(jié)腸癌紫衫醇耐藥株    T25    上皮樣    貼壁生長    RPMI-1640    1：2傳代

HCT-8/V細(xì)胞    結(jié)腸癌長春新堿耐藥株    T25    上皮樣    貼壁生長    RPMI-1640    1：2傳代

SW620細(xì)胞    結(jié)腸癌細(xì)胞；SW620    T25    上皮樣    貼壁生長    SW620是從一個(gè)51歲男性白人組織中分離得到。由A.Leibovitz等從一個(gè)淋巴結(jié)建株。細(xì)胞系主要由無絨毛的小園球細(xì)胞和雙極細(xì)胞組成。它僅合成少量癌胚抗原（CA-A）且在裸鼠中有高度的致瘤性    DMEM(高糖）+10%FBS    1:3傳代，2-3天換液一次

SW480細(xì)胞    結(jié)腸癌細(xì)胞；SW480    T25    上皮樣    貼壁生長    SW480源自一位51歲白人男性患者的原位直腸腺癌，而SW620源自同一病人一年后的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶。該細(xì)胞CSAp和直腸抗原3陰性；角蛋白陽性；p53基因第273位密碼子的G→A突變引起Arg→His替代，309位密碼子的C→T突變導(dǎo)致Pro→Ser替代；細(xì)胞p53蛋白表達(dá)水平升高；癌基因CS-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達(dá)呈陽性；未檢測到癌基因N-myc的表達(dá)；不表達(dá)Matrilysin（一種與腫瘤侵襲相關(guān)的金屬蛋白酶）。    L15: Leibovitz Medium  10%FBS　 無二氧化碳培養(yǎng)    1:2傳代，CQ-E2天換液一次

LOVO細(xì)胞    結(jié)腸癌細(xì)胞;LOVO    T25    上皮樣    貼壁生長    LoVo建自1971年，從診斷為結(jié)腸腺癌的56歲男性白人的一個(gè)轉(zhuǎn)移到左鎖骨上區(qū)的腫瘤結(jié)節(jié)建系。癌基因CS-myc,K-ras,H-ras,N-ras,Myb,sis和fos的表達(dá)呈陽性。癌基因N-myc的表達(dá)未做檢測。它在裸鼠中能成瘤。與107細(xì)胞聯(lián)合皮下接種５只裸鼠21天后全部成瘤。表達(dá)腫瘤特異的核基質(zhì)蛋白蛋白CCS-3和CCS-4。    F12K+10%FBS    1:3傳代，2-3天換液一次

HT-29細(xì)胞    結(jié)腸癌細(xì)胞；HT-29    T25    上皮樣    貼壁生長    該細(xì)胞是1964年由FoghJ用移植培養(yǎng)方法和含15%FBS的F12培養(yǎng)液從原發(fā)性腫瘤分離的。近來，已建株的培養(yǎng)細(xì)胞用含血清的McCoy's5a培養(yǎng)基培養(yǎng)。該細(xì)胞系在裸鼠中成瘤，也能在類固醇處理的地鼠中成瘤。該細(xì)胞可合成IgA、CA-A、TGFβ結(jié)合蛋白和黏液素；表達(dá)尿激酶受體，但沒有檢測到血漿酶原活性；不表達(dá)CD4，但細(xì)胞表面表達(dá)半乳糖神經(jīng)酰胺（HIV的可能替代受體）。該細(xì)胞系癌基因CS-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis、fos陽性；p53基因過表達(dá)，并且在273位密碼子處發(fā)    DMEM（高糖）+10%FBS    1：2傳代

HCT-8細(xì)胞    結(jié)腸癌細(xì)胞；HCT-8    T25    上皮樣    貼壁生長    該細(xì)胞角蛋白陽性；表達(dá)CA-A、堿性磷酸酶；與HRT-18為同一細(xì)胞。     RPMI1640+10%FBS    1:3傳代，2-3天換液一次

HCT-15細(xì)胞    結(jié)腸癌細(xì)胞；HCT-15    T25    上皮樣    貼壁生長    DNA fingerprinting證據(jù)表明，這株細(xì)胞和DLD-1(ATCC CCL-221,人結(jié)直腸腺癌)來源于同一個(gè)人；但同工酶及細(xì)胞染色體組型分析仍存疑問；細(xì)胞呈CSAp陰性(CSAp-)；角蛋白陽性。     RPMI1640+10%FBS    1：2傳代

HCT-116細(xì)胞    結(jié)腸癌細(xì)胞；HCT-116    T25    上皮樣    貼壁生長    HCT116是1979年M.Brattain等從患結(jié)腸癌的男性病人中分離的三株惡性細(xì)胞之一。在半固體瓊脂糖培養(yǎng)基中形成克隆。HCT116在無胸腺的裸鼠有致瘤性，形成上皮樣的腫瘤    McCOY's5A+10%FBS    1:3傳代，CQ-4天換液一次

COLO205細(xì)胞    結(jié)腸癌細(xì)胞；COLO205    T25    懸浮    該細(xì)胞系是1957年由T.U.Sample等從患有結(jié)腸癌的70歲男性白人的腹水中分離的。該病人在取腹水樣品前已用5-氟尿嘧啶治療4~6周。角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性；產(chǎn)生CA-A、IL10。    RPMI1640+10%FBS    1：2傳代

Caco2細(xì)胞    結(jié)腸癌細(xì)胞；Caco2    T25    上皮樣    貼壁生長    此細(xì)胞株分離自一個(gè)原發(fā)性結(jié)腸癌。當(dāng)細(xì)胞長滿時(shí)，表現(xiàn)出典型的腸細(xì)胞分化的特征。Caco-2細(xì)胞表達(dá)維生素A酸結(jié)合蛋白I和視黃醇結(jié)合蛋白II，角蛋白陽性。    RPMI1640+10%FBS    1：2傳代

RKO細(xì)胞    結(jié)腸癌細(xì)胞（低分化）；RKO    T25    上皮樣    貼壁生長    RKO是一個(gè)低分化的結(jié)腸癌細(xì)胞系。RKO細(xì)胞含有野生型P53，但缺乏人甲狀腺受體核受體(h-TRbeta1)。RKO細(xì)胞的P53蛋白的水平高于RKO-E6細(xì)胞。RKO細(xì)胞系是RKO-E6和RKO-AS45-1的親本細(xì)胞系。該細(xì)胞系在裸鼠中成瘤，且在軟瓊脂中形成集落。    DMEM(高糖）+10%FBS    消化CQ-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。

HCT/FU細(xì)胞    結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株    T25    上皮樣    貼壁生長    RPMI-1640    1：2傳代

核受體亞家族3C組成員1ELIS檢測A試劑盒    Nuclear Receptor Subfamily 3, Group C, Member 1

利什曼病ELIS檢測A試劑盒    leishmaniasis

類風(fēng)濕因子IgM抗體ELIS檢測A試劑盒    rheumatoid factor IgM

類風(fēng)濕因子IgA抗體ELIS檢測A試劑盒    rheumatoid factor IgA

類風(fēng)濕因子IgG抗體ELIS檢測A試劑盒    rheumatoid factor IgG

布魯東氏酪氨酸激酶ELIS檢測A試劑盒    Bruton'S Tyrosine Kinase

肺炎衣原體IgG抗體ELIS檢測A試劑盒    Chlamydiapneumoniae IgG

肺炎衣原體IgM抗體ELIS檢測A試劑盒    Chlamydiapneumoniae IgM

抗髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白抗體ELIS檢測A試劑盒    myelin oligodendrocyte glycoprotein antibody

抗新蝶呤抗體ELIS檢測A試劑盒    Neopterin antibody

細(xì)粒棘球絳蟲糞IgG抗體ELIS檢測A試劑盒    Echinococcus granulosus IgG

細(xì)粒棘球絳蟲糞IGM抗體ELIS檢測A試劑盒    Echinococcus granulosus IGM

維生素D結(jié)合蛋白1ELIS檢測A試劑盒    Vitamin D-binding protein 1

誘導(dǎo)骨髓白血病細(xì)胞分化蛋白Mcl-1ELIS檢測A試劑盒    Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1

肌骨素ELIS檢測A試劑盒    Myostatin

3-甲氧基去甲腎上腺素ELIS檢測A試劑盒    3-normetanephrine

3-甲氧基腎上腺素ELIS檢測A試劑盒    3-metanephrine

血小板內(nèi)皮細(xì)胞聚集受體 1ELIS檢測A試劑盒    Platelet endothelial aggregation receptor 1

冠蛋白1CELIS檢測A試劑盒    Coronin 1C

CHO-K1細(xì)胞硒磷酸合成酶1ELIS檢測A試劑盒    selenophosphate synthetase I

乙酰輔酶A羧化酶合成酶ELIS檢測A試劑盒    acetyl-CoA carboxylase synthetase

維甲酸ELIS檢測A試劑盒    Tretinoin

組蛋白去乙酰化酶2ELIS檢測A試劑盒    Histone Deacetylase 2

組蛋白去乙?；?ELIS檢測A試劑盒    Histone Deacetylase 3    
注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。